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北京恒奧德儀器儀表有限公司
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恒奧德儀器水質(zhì)活性氧檢測(cè)儀操作步驟注意事項(xiàng)

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詳細(xì)介紹

恒奧德儀器活性氧檢測(cè)儀操作步驟注意事項(xiàng)

 

 

基于熒光探針技術(shù),通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平評(píng)估氧化應(yīng)激狀態(tài)。常用熒光探針為 DCFH-DA 2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽),其原理如下:

檢測(cè)原理

DCFH-DA本身無(wú)熒光,可自由穿透細(xì)胞膜。進(jìn)入細(xì)胞后被酯酶水解生成 DCFH ,DCFH因無(wú)法通透細(xì)胞膜而積聚于細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)ROS可氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的 DCF (二氯熒光素),熒光強(qiáng)度與ROS水平成正比。 ?

操作步驟

?探針裝載?

短時(shí)間刺激(2小時(shí)內(nèi))的細(xì)胞:先裝載探針再刺激;長(zhǎng)時(shí)間刺激(6小時(shí)以上)的細(xì)胞:先刺激再裝載探針。 ?

貼壁細(xì)胞采用原位裝載(直接加入探針),懸浮細(xì)胞需收集后裝載。 ?

?熒光檢測(cè)?

使用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀或激光共聚焦顯微鏡,在激發(fā)波長(zhǎng)480nm和發(fā)射波長(zhǎng)525nm下檢測(cè)DCF熒光強(qiáng)度。 ?

注意事項(xiàng)

裝載探針后需洗凈殘留未進(jìn)入細(xì)胞的探針,避免背景干擾。 ?

盡量縮短探針裝載至檢測(cè)的時(shí)間間隔,減少誤差